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    H2S 含量測定試劑盒說明書

    H2S 含量測定試劑盒說明書
    可見分光光度法 正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
    產品內容:
    提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。試劑一:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。試劑二:液體 15mL×1 瓶,4℃保存。
    試劑三:液體 15mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑四:液體 15mL×1 瓶,4℃保存。
    試劑五:液體 3mL×1 管,4℃避光保存。
    產品說明:
    H2S 是一種新型氣態信號分子,存在于腦內的神經遞質,生理濃度的 H2S 對神經系統海馬的長時程增強功能具有重要的調節作用,并對自發性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發揮著重要的病理生理效應。
    H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應生成亞甲基藍,亞甲基藍在
    665nm 處有最大吸收峰,通過測定其吸光值可計算 H2S 含量。
    需自備的儀器和用品:
    天平、低溫離心機、可見分光光度計 1ml 玻璃比色皿、蒸餾水。
    操作步驟:
    一、樣品處理:
    1. 組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10  的比例(建議稱取約 0.1g  組織,加入 1mL 提取液)進行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
    2. 細菌、真菌:按照細胞數量(10 4 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1  的比例(建議
    500  萬細胞加入 1mL  提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3  秒,間隔 7
    秒,總時間 3min);然后 10000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
    3. 血清(漿):直接測定。
    二、測定步驟: (取 1.5ml 離心管,按照下表操作)
      空白管 測定管
    樣品(μL)   250
    H2O(μL) 250  
    試劑一(μL) 250 250
    充分震蕩混勻
    試劑二(μL) 250 250
     
    12000rpm,4℃,離心 10min,去上清,留沉淀
    H2O(μL) 500 500
    12000rpm,4℃,離心 10min,去上清,留沉淀
    試劑一(μL) 250 250
    試劑三(μL) 250 250
    充分震蕩混勻
    試劑四(μL) 250 250
    12000rpm,4℃,離心 10min,取上清
    試劑五(μL) 50 50
    混勻,25℃靜置20min,于微量石英比色皿/96孔板中,空白管調零,測定665nm吸光值,
    記為A665。
     
    三、H2S 含量計算公式:
    標準曲線回歸方程為:y = 0.0044x,R2 = 0.9988
    (1)組織樣品
    a.按照蛋白濃度計算
    H2S(μmol/mg prot)= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr
    b.按照樣本重量計算
    H2S(μmol/g)= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10-3 = 0.727×A665÷W
    (2)液體樣本
    H2S(μmol/L)= A665÷0.0044×V 反總÷V 樣= 727×A665
    (3)細胞
    H2S(μmol/104 cell)= A665÷0.0044×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細胞數量(萬個))×10-3
    =0.727×A665÷細胞數量(萬個)
    V 反總:反應總體積,0.8mL;V 樣:反應中樣品體積,0.25mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質量,g;Cpr:蛋白濃度,mg/mL。
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