姬姆薩染色液(Giemsa Stain,1:9)

姬姆薩染色液(Giemsa Stain,1:9)

姬姆薩色素(又稱吉姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成。Giemsa 染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同，姬姆薩染色液對(duì)胞漿著色力較強(qiáng)，能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度，特別是對(duì)血液和骨髓細(xì)胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒，著色清晰，但是對(duì)胞核著色偏深, 核結(jié)構(gòu)顯色不佳，故姬姆薩染液常與瑞氏染液聯(lián)合使用。Giemsa Stain 以進(jìn)口的姬姆薩色素、甲醇為主要原料，含特有襯染劑，經(jīng)研磨配制而成，能呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果，經(jīng)常用于組織切片、血液和細(xì)胞涂片、細(xì)菌、染色體顯帶、原生動(dòng)物寄生蟲等染色。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。
Giemsa Stain(1:9)由 10×儲(chǔ)存液和磷酸鹽緩沖液組成，1:9 混合成工作液后
使用；亦可以分開使用，即先用 Giemsa Stain 染色，再經(jīng)磷酸鹽緩沖液處理，亦可以得到
滿意的染色效果。

產(chǎn)品組成：

試劑(A): Giemsa Stain 儲(chǔ)存液(10×)
100ml 10ml
500ml 50ml

RT 避光

試劑(B): 磷酸鹽緩沖液
100ml 500ml RT

自備材料：

1、載玻片、顯微鏡
2、蒸餾水
3、甲醇
4、 0.1～0.5%乙酸

操作步驟(僅供參考)：

(一)一步法涂片染色

1、Giemsa 工作液的配制：
按試劑(A):試劑(B)=1:9 混合，即取 1 份 Giemsa Stain 儲(chǔ)存液(10×)加入到 9 份的磷酸
鹽緩沖液中充分混勻，即為 Giemsa 工作液，為即用型試劑，不易保存，即用即配。

2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定 1～3min。
3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加 Giemsa 工作液覆蓋涂片，室溫滴染 15～ 30min。
4、用自來(lái)水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。
5、干燥、鏡檢。

染色結(jié)果：

嗜酸性顆粒嗜堿性顆粒中性顆粒

(二)兩步法涂片染色

1、Giemsa 工作液的配制：
粉紅色紫藍(lán)色淡紫色

按試劑(A):蒸餾水=1:4 混合，即取 1 份的 Giemsa Stain 儲(chǔ)存液(10×)加入到 4 份的蒸餾水中充分混勻，即為 Giemsa 工作液。Giemsa 工作液為即用型試劑，不易保存，即用即配。
2、常規(guī)方法制備血液涂片或骨髓涂片，待涂片自然干燥后，用甲醇固定 1～3min。
3、將血液涂片或骨髓涂片置于染色架上，滴加適量 Giemsa 工作液覆蓋涂片，室溫滴染
10～15min。
4、加入等量磷酸鹽緩沖液，輕輕晃動(dòng)載玻片，室溫靜置 5～10min。
5、用自來(lái)水或蒸餾水緩慢從玻片一端沖洗。
6、干燥、鏡檢。

染色結(jié)果：

嗜酸性顆粒嗜堿性顆粒中性顆粒

(三)組織切片染色

1、Giemsa 工作液的配制：
粉紅色紫藍(lán)色淡紫色

按試劑(A):試劑(B) =1:9 混合，即取 1 份 Giemsa Stain 儲(chǔ)存液(10×)加入到 9 份磷酸鹽緩沖液中充分混勻，即為 Giemsa 工作液。Giemsa 工作液為即用型試劑，不易保存，
即用即配。
2、新鮮組織立即置于 Regaud 固定液固定 2 天，期間應(yīng)更換 1 次固定液。
3、3%重鉻酸鉀固定 1 天。
4、流水沖洗 16 個(gè)小時(shí)或過(guò)夜。
5、照常規(guī)脫水、包埋。

6、切片厚度約為 5μm，常規(guī)脫蠟至水。
7、蒸餾水清洗 2 次，每次 1min。
8、入含 Giemsa 工作液染缸，浸染 18～24h。
9、蒸餾水稍微清洗。
10、0.1～0.5%乙酸洗 1～2min。
11、自來(lái)水稍微沖洗。
12、用無(wú)水乙醇迅速脫水 3 次，每次 5～10s。
13、二甲苯透明，中性樹脂封固。

染色結(jié)果：

細(xì)胞核藍(lán)色至紫色
細(xì)胞質(zhì) 淡藍(lán)色

嗜鉻細(xì)胞胞質(zhì)結(jié)締組織
黃綠色淡紅色

注意事項(xiàng)：

1、血液涂片或骨髓涂片應(yīng)厚薄均勻，以免影響染色效果。
2、涂片染色中 Giemsa 染色后，請(qǐng)勿先去除染液或直接對(duì)涂片用力沖洗。
3、如果染色過(guò)深或過(guò)淺，應(yīng)調(diào)整染色時(shí)間或工作液濃度。
4、涂片染色和組織切片染色中，pH 值對(duì)染色有一定影響，載玻片應(yīng)清潔、無(wú)酸堿污染，以免影響染色效果。
5、染色液經(jīng)稀釋后液面應(yīng)金屬光澤則表示染液有染色作用，否則染色液可能失效。
6、組織切片染色中，染色后需用大量 0.1～0.5%乙酸急速?zèng)_洗，避免浮面沉淀物污染切片后難以洗脫。
7、0.5%乙酸分化常用于 Giemsa 組織切片染色，如有必要亦可用于細(xì)胞涂片，但其濃度應(yīng)
適量下調(diào)。0.5%乙酸分化切片時(shí)，切片呈粉紅色即可終止。
8、Giemsa 組織切片染色中，無(wú)水乙醇脫水要迅速，否則切片易褪色。
9、涂片染色和組織切片染色中，如需急速獲得結(jié)果，可按 Giemsa Stain 儲(chǔ)存液(10×):磷酸鹽緩沖液=1:1 配制 Giemsa 工作液，充分混勻，即為快速 Giemsa 染色工作液，將染色液滴加于細(xì)胞涂片或組織切片上，加熱染色，20～30s 后重新加染色液，反復(fù) 5～10 次，
其余步驟同上。
10、染色液可重復(fù)使用，但不能多次重復(fù)，若有沉淀物應(yīng)過(guò)濾后使用。
11、Regaud 固定液: 按 3%重鉻酸鉀:甲醛=4:1 配制，臨用前混勻，1～2 天后失效。
有效期：24 個(gè)月有效。

姬姆薩染色液(Giemsa Stain,即用型)http://www.xumufengji.cn/article/135.html