人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)培養說明書

人非小細胞肺癌細胞耐藥亞株(A549/DDP)
貨號：HRCL-031/DDP
 
細胞介紹
這株細胞是用藥物劑量增選法篩選獲得的A549細胞耐藥亞株。。
 
細胞特性
1） 來源：肺癌
2） 形態：上皮細胞樣
3） 含量：>1x10⁶ 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
 
運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
 
細胞用途：僅供科研使用。
                       
細胞培養步驟
一． 培養基及培養凍存條件準備：
注意：客戶收到細胞后按照下面的要求操作：培養瓶里面的培養液是不含藥物的。待細胞長到 70-80%的匯合度時，去掉培養液，加入含 500ng/ml DDP藥物的培養液，放入培養箱，這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來，但是不要緊，通過換液可以去掉，下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶了，這時可以一直用含藥培養液來消化培養細胞，一兩代之后可以將藥物濃度提高到 800ng/ml，含藥培養液用于細胞培養都沒問題的，凍存的時候就不要在凍存液里面加藥物了。
1） 準備1640培養基(Gibco)，90%；優質胎牛血清，10%，添加PS，1%，1~2ug/ml DDP。
2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
 
注意事項：
1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。


細胞培養設備與液體的滅菌
無血清培養基的缺點